Determina a quién quieres perseguir.
Los objetivos proteicos son muy difíciles de identificar. El nombre, la abreviatura, las isoformas, la variante de empalme y los cambios in vivo de una proteína pueden tener una variedad de nombres y abreviaturas, así como una posible reactividad cruzada con proteínas estrechamente relacionadas. Además, durante la fabricacion de anticuerpos, el sitio de unión del anticuerpo puede verse oscurecido por compañeros de unión celulares. Para complicar aún más las cosas, diferentes dominios de estudio pueden usar diferentes términos para el mismo objetivo. Asegúrese de estar familiarizado con la biología de su objetivo y la capacidad del anticuerpo para identificar su objetivo en las circunstancias que ha seleccionado. Encuentre identificaciones únicas para su objetivo mediante el uso de bases de datos genéticas y de proteínas, como UniProt o GeneCards. Para asegurarse de que su estudio sea exitoso, asegúrese de que el epítopo contra el cual se generó el anticuerpo sea bien conocido y esté dentro del dominio necesario.
El anticuerpo debe ser compatible con el tipo y la especie de su muestra.
La estructura y la secuencia de los objetivos varían de una especie a otra. No hay garantía de que un anticuerpo funcione a menos que la hoja de datos diga que ha sido probado en una especie específica. Por lo tanto, lo que proponemos son anticuerpos que han sido validados para su especie de interés. Los anticuerpos específicos son fácilmente accesibles para las especies de estudio utilizadas con más frecuencia. Las especies exóticas, por otro lado, pueden ponerlo en desventaja. Pero no te desanimes. Un anticuerpo puede detectar una proteína diana incluso si la homología de secuencia de los epítopos es tan baja como el 75 %, ya que los anticuerpos a menudo se producen contra regiones muy conservadas de la proteína diana. La validación del rendimiento del anticuerpo y la especificidad de especie será suficiente, también se puede optar por la producción de anticuerpos policlonales.
Las variantes de corte y empalme alternativas o distintas modificaciones postraduccionales pueden afectar el rendimiento de un anticuerpo, al igual que los niveles de expresión de proteínas diana y no diana estrechamente relacionadas en diferentes especies, tejidos o tipos de células. Quiere un anticuerpo que se haya